胃癌组织中HOXC10表达与临床病理特征及预后关系的研究

1.1 临床资料

选择2010年1月至2012年12月在柳州市人民医院接受胃癌根治术的264例患者以及2017年1月至2017年6月接受胃癌根治术白的20例患者的新鲜胃癌组织及相应癌旁正常组织(距肿瘤边缘>2 cm)。所有患者均经病理检查确诊为胃腺癌.术前均未接受化学治疗和放射治疗,统一根据国际抗癌联盟(UICC)第八版TNM分期标准进行分期.依据美国国立综合癌症网络(NCCN)胃癌诊治实践威廉亚洲博彩公司 进行术后辅助治疗。所有患者知情并签署由医院伦理委员会批准的知情同意书。

1.2 RNA提取和实时荧光定量PCR检测

按照Trizol法提取胃癌组织及癌旁组织的总RNA,用核酸蛋白检测仪对RNA的浓度和纯度进行测定;按照逆转录反应体系要求进行qRT-PCR,所用的HOXC10、人B-actin内参引物见表1。HOXC10 mRNA相对于人β-actin表达量的计算方法为2-4ct(ACt=癌组织或癌旁组织中HOXC10的Ct值-相同样本中人β-actin的Ct值)。HOXC10 mRNA在胃癌组织与癌旁组织中的相对表达量的计算方法为:2-40Ct(0ACt=ACt癌组织ACt癌旁组织)。根据胃癌组织相对癌旁组织的HOXC10表达水平将样本分成2组<1为低表达组,>1为高表达组。

1.3 免疫组织化学检测

用4%福尔马林固定组织,然后用石蜡包埋切片(厚度4 um)。脱蜡后.切片用3%H202封闭内源性过氧化物酶.加入10 mL(pH 60)枸橼酸钠缓冲液中.92C~95C加热15 min,进行抗原修复。用5% BSA封闭非特具性抗原将用5% BSA1:100释释的兔抗人HOXC10单克降抗体加到玻片上完全覆盖组织4C冰箱孵育过夜.PBS漂洗2次5 min)。将二抗(山羊抗兔)加到玻片上,完全覆盖组织,37C湿盒孵育40 min.PB S漂洗2次(5 min)。用DAB显色显微镜观察.反应时间控制在2~4 min,自来水冲洗终止显示。用苏木素室温复染30 min,自来水冲没先返蓝.梯度乙醇溶液脱水二甲苯透明.中性树胶封片后于显微镜下观察。

1.4 随访情况

本研究随访终点为随访时间满5年或患者死亡。无复发生存期(RFS)定义为从患者接受手术开始到出现肿瘤复发、进展或因各种原因导致死亡的时间。OS定义为从患者接受手术开始至因任何原因导致死亡之日或随访结束之日的时间，

1.5 统计学方法

采用SPSS 19.0和GraphPad Prism 7软件进行数据分析和作图，采用配对t检验分析胃癌组织与癌旁组织中HOXC10的表达差异.采用x2检验分析临床病理特征与HOXC10相对表达水平的关系。采用Kaplan -Meier方法分析HOXC10表达水平与RFS、OS的关系。采用Cox回归分析单因素、多因素与RFS、OS的关系。用二元Logistic回!日分析建立Logistic回归模型。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 胃癌及癌旁组织中HOXC10 mRNA表达情况

结果显示,HOXC10 mRNA在胃癌组织中表达较癌旁组织显著上调(图1),差异有统计学意义(P<0.05)。HOXC10 mRNA在胃高分化腺癌(I级)、中分化腺癌(Ⅱ级)中低表达,在胃低分化腺癌(Ⅲ级)中高表达，差异有统计学意义(P<0.05)。

2.2 HOXC10表达水平与患者临床病理特征的相关性分析

本研究共纳入264例胃癌患者,其临床病理特征数据见表2。HOXC10表达水平与患者性别及年龄不明显相关(P>0.05)。HOX C10表达水平与患者病理分级、Lauren分型、TNM分期、肿瘤浸润深度(T分期)及淋巴结转移数量(N分期)等临床病理特征明显相关.HOXC10在病理分级差、弥漫型、TNM分期晚、肿瘤浸润深、淋巴结转移多的的患者中高表达(P<0.05)。

2.3 HOXC10表达水平与预后的关系

根据HOXC10表达水平将样本分为高表达组和低表达组.进行Kaplan-Meier生存分析,两组比较结果显示,HOXC10低表达组的的RFS和OS均长于高表达组,差异均有统计学意义(P均<0.001)。见图3

2.4 临床病理特征及HOXC10表达水平与预后的Cox回归分析

单因素Cox回归分析显示病理分级，Lauren分型，TNM分期，T分期，N分期及HOXC10表达水平与RES及OS均显著相关关(P<0.05),而性别和年龄与RFS和OS无显著相关性(P>0.05)。剔除性别、年龄后进一步进行多因素Cox回归分析.发现病理分级、Lauren分型、TNM分期、T分期、N分期及HOXC10表达水平与胃癌患者的RF S及OS均显著相关(P<0.05)。

2.5 Logistic回归模型

根据Cox多因素风险回归模型分析结果.将与胃癌患者RFS及OS有密切相关性的病理分级、Lauren分型、TNM分期、T分期、 N分期及HOXC10表达水平6个变量纳入Logistic回归模型。再根据Logistic回归分析结果.纳入病理分级，Lauren分型、TNM分期、T分期和N分期5个变量作为基于传统临床病理特征参数预测胃癌患者5年内复发或死亡风险。然后再纳入病理分级、Lauren分型、TNM分期、T分期和HOXC10表达水平5个变量作为基于HOXC10表达水平预测胃癌患者5年内复发或死亡风险,基于两组参数平行原则,未纳入N分期作为参数。基于传统临床病理特征参数预测的胃癌患者5年内复发风险模型受试者工作特征(ROC)曲线下面积(0.844.95%CI:0.790~0.898)与基于HOXC10参数预测的胃癌患者5年内复发风险模型的ROC曲线下面积(0.841.95%CI:0.787~0.895)比较,差异无统计学意义(P>0.05)。基于传统临床病理特征参数预测的胃癌患者5年内死广风险模型的ROC曲线下面积(0.867.95%C1:0.815~0.919)与基干HOXC10参数预测的胃癌惠患者5年内死亡风险模型的曲线下面积(0.858.95%C1:0.804~0.912)比较.差异亦无统计学意义(P>0.05)。