NAT MED:特异性基因编辑防止耳聋
2019-07-06 海北 MedSci原创
为了克服这些限制,研究人员筛选了14种Cas9 / gRNA组合,用于特异和有效地破坏引起显性进行性听力损失的核苷酸替代DFNA36。
由于大多数显性人类突变是单核苷酸取代,研究人员探索基因编辑策略以有效和选择性地破坏显性突变,而不影响野生型等位基因为准。
然而,单核苷酸区分可能难以实现,因为常用的核酸内切酶,例如酿脓链球菌Cas9(SpCas9),可以耐受指导RNA(gRNA)和靶DNA之间多达七个错配。此外,一些Cas9酶中的原型间隔区相邻基序(PAM)可以耐受与靶DNA的错配。
为了克服这些限制,研究人员筛选了14种Cas9 / gRNA组合,用于特异和有效地破坏引起显性进行性听力损失的核苷酸替代DFNA36。
作为DFNA36的模型,研究人员使用Beethoven小鼠,其在Tmc1中具有点突变,Tmc1是听觉所需的基因,其编码内耳毛细胞中的机械感觉转导通道的成孔亚基。
研究人员鉴定了金黄色葡萄球菌Cas9(SaCas9-KKH)的PAM变体,其在贝多芬小鼠和DFNA36人细胞系中选择性且有效地破坏突变等位基因,但不破坏野生型Tmc1 / TMC1等位基因。
腺相关病毒(AAV)介导的SaCas9-KKH在注射后一年内预防了贝多芬小鼠的耳聋。
对当前ClinVar条目的分析显示,使用类似方法可以靶向~21%的显性人类突变。
原始出处:
György B et al. Allele-specific gene editing prevents deafness in a model of dominant progressive hearing loss. NAT MED, 2019; doi: 10.1038/s41591-019-0500-9.
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